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土壤酶活檢測
土壤酶活檢測
土壤酶是土壤中重要的生物活性物質(zhì),參與有機(jī)質(zhì)的分解和養(yǎng)分循環(huán)。常見的土壤酶包括脲酶、磷酸酶、蔗糖酶、過氧化氫酶等。
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  土壤酶是土壤中重要的生物活性物質(zhì),參與有機(jī)質(zhì)的分解和養(yǎng)分循環(huán)。常見的土壤酶包括脲酶、磷酸酶、蔗糖酶、過氧化氫酶等。以下是幾種常見土壤酶活性的檢測方法:

  1. 脲酶活性測定

  原理:脲酶催化尿素水解生成氨和二氧化碳,通過測定氨的生成量來反映脲酶活性。

  試劑與材料:

  尿素溶液(10%)

  檸檬酸緩沖液(pH 6.7)

  苯酚-次氯酸鈉試劑

  分光光度計(jì)

  操作步驟:

  樣品處理:取1g土壤,加入2mL尿素溶液和1mL檸檬酸緩沖液,37℃培養(yǎng)24小時(shí)。

  顯色反應(yīng):加入5mL苯酚-次氯酸鈉試劑,靜置20分鐘。

  測定吸光度:在625nm波長下測定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算氨的生成量。

  計(jì)算:

  脲酶活性(mg NH??-N/g·h)= (C × V) / (T × W)

  C:氨濃度(mg/mL)

  V:反應(yīng)體積(mL)

  T:反應(yīng)時(shí)間(h)

  W:土壤重量(g)

  2. 磷酸酶活性測定

  原理:磷酸酶催化有機(jī)磷化合物水解生成無機(jī)磷,通過測定無機(jī)磷的生成量來反映磷酸酶活性。

  試劑與材料:

  對硝基苯磷酸二鈉(PNPP,底物)

  Tris-HCl緩沖液(pH 6.5)

  氫氧化鈉(NaOH)

  分光光度計(jì)

  操作步驟:

  樣品處理:取1g土壤,加入1mL PNPP溶液和2mL Tris-HCl緩沖液,37℃培養(yǎng)1小時(shí)。

  終止反應(yīng):加入1mL NaOH溶液(0.5mol/L)。

  測定吸光度:在405nm波長下測定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算無機(jī)磷的生成量。

  計(jì)算:

  磷酸酶活性(μmol PNP/g·h)= (C × V) / (T × W)

  C:對硝基苯酚(PNP)濃度(μmol/mL)

  V:反應(yīng)體積(mL)

  T:反應(yīng)時(shí)間(h)

  W:土壤重量(g)

  3. 蔗糖酶活性測定

  原理:蔗糖酶催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,通過測定還原糖的生成量來反映蔗糖酶活性。

  試劑與材料:

  蔗糖溶液(8%)

  磷酸緩沖液(pH 5.5)

  3,5-二硝基水楊酸(DNS)試劑

  分光光度計(jì)

  操作步驟:

  樣品處理:取1g土壤,加入1mL蔗糖溶液和2mL磷酸緩沖液,37℃培養(yǎng)24小時(shí)。

  顯色反應(yīng):加入1mL DNS試劑,沸水浴5分鐘,冷卻后稀釋。

  測定吸光度:在540nm波長下測定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算還原糖的生成量。

  計(jì)算:

  蔗糖酶活性(mg葡萄糖/g·h)= (C × V) / (T × W)

  C:葡萄糖濃度(mg/mL)

  V:反應(yīng)體積(mL)

  T:反應(yīng)時(shí)間(h)

  W:土壤重量(g)

  4. 過氧化氫酶活性測定

  原理:過氧化氫酶催化過氧化氫分解生成水和氧氣,通過測定過氧化氫的消耗量來反映過氧化氫酶活性。

  試劑與材料:

  過氧化氫溶液(0.3%)

  磷酸緩沖液(pH 7.0)

  硫酸(H?SO?)

  高錳酸鉀溶液(0.02mol/L)

  滴定管

  操作步驟:

  樣品處理:取1g土壤,加入5mL過氧化氫溶液和5mL磷酸緩沖液,室溫反應(yīng)30分鐘。

  終止反應(yīng):加入5mL硫酸溶液(1mol/L)。

  滴定:用高錳酸鉀溶液滴定剩余的過氧化氫,記錄消耗量。

  計(jì)算:

  過氧化氫酶活性(mL 0.02mol/L KMnO?/g·h)= (V? - V) / (T × W)

  V?:空白滴定消耗的高錳酸鉀體積(mL)

  V:樣品滴定消耗的高錳酸鉀體積(mL)

  T:反應(yīng)時(shí)間(h)

  W:土壤重量(g)

  5. 纖維素酶活性測定

  原理:纖維素酶催化纖維素水解生成還原糖,通過測定還原糖的生成量來反映纖維素酶活性。

  試劑與材料:

  羧甲基纖維素鈉(CMC,底物)

  醋酸緩沖液(pH 5.0)

  DNS試劑

  分光光度計(jì)

  操作步驟:

  樣品處理:取1g土壤,加入1mL CMC溶液和2mL醋酸緩沖液,50℃培養(yǎng)24小時(shí)。

  顯色反應(yīng):加入1mL DNS試劑,沸水浴5分鐘,冷卻后稀釋。

  測定吸光度:在540nm波長下測定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算還原糖的生成量。

  計(jì)算:

  纖維素酶活性(mg葡萄糖/g·h)= (C × V) / (T × W)

  C:葡萄糖濃度(mg/mL)

  V:反應(yīng)體積(mL)

  T:反應(yīng)時(shí)間(h)

  W:土壤重量(g)

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